檢測細胞轉染效率的方法有哪些?

 一、實時定量PCR檢測

實時熒光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）是一種在DNA擴增反應中，以熒光化學物質測每次聚合酶鏈式反應（PCR）循環(huán)后產物總量的方法。通過內參或者外參法對待測樣品中的特定DNA序列進行定量分析的方法。Real-time PCR是在PCR擴增過程中，通過熒光信號，對PCR進程進行實時檢測。由于在PCR擴增的指數時期，模板的Ct值和該模板的起始拷貝數存在線性關系，所以成為定量的依據。但是，熒光定量PCR所檢測的是轉染后細胞中待測基因的mRNA的表達水平，對于目的基因的蛋白表達水平不能夠檢測。
 
二、Wester Blot檢測
Western Blot又稱蛋白質免疫印跡（免疫印跡實驗），其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或者生物組織樣品進行著色，并通過分析著色的位置和著色的深度獲得特定蛋白在所分析的細胞或者組織中表達情況的信息。Western Blot所檢測的是組織或者細胞中蛋白質的表達水平。 
 
三、流式細胞術 
流式細胞術（Flow Cytometry，FCM）是一種在功能水平上對細胞或者其他生物粒子進行定量檢測和分析的檢測手段，它可以高速分析上萬個細胞，并能同時從一個細胞中檢測得到多個參數，與傳統(tǒng)檢測方法相比具有更加快速、準確以及定量等特點。使用流式細胞術檢測轉染效率可以更加精que的確定轉染的效率，對轉染效率進行量化。 
 
四、熒光顯微鏡觀察

當我們轉染的質粒DNA含有熒光蛋白基因是，可以通過熒光顯微鏡觀察的方法來確定轉染的效率，在熒光顯微鏡下，可以觀察到熒光的強弱以及熒光的效率。

 

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